Возбудитель дифтерии, его микробиология и характеристика

Возбудитель дифтерии

1. Возбудитель дифтерии Corynebacterium diphtheriae выделен в чистой культуре Леффлером в 1884 г.

Размеры дифтерийной палочки: длина 1—6 мкм, толщина 0,3— 0,8 мкм. Отличительной особенностью возбудителя дифтерии является многообразие форм —наряду с длинными изогнутыми, изящными «типичными» палочками микробов встречаются короткие толстые с колбовидными вздутиями на концах, иногда коккообразные клетки, что придает микробу сходство с булавой. В колбовидных вздутиях часто находят волютиновые зерна (тельца Бабеша-Эрнета).

Характерен общий вид препарата, особенно если мазок взят с большим количеством микробов. Микробы лежат большими скоплениями и напоминают пакет булавок. В окрашенных мазках могут быть расположены попарно, под острым или прямым углом друг к другу, напоминая римскую цифру V. Дифтерийные микробы неподвижны, спор не образуют, жгутиков не имеют, грамположительные, хорошо окрашиваются основными анилиновыми красками, причем особенно интенсивно окрашиваются волютиновые зерна. При окрашивании по Кецссеру характерной особенностью является то, что зерна волютина окрашиваются в сине-черный цвет, контрастирующий со светло-коричневой окраской всей микробной клетки.

2. Биология: дифтерийные микробы хорошо развиваются при свободном доступе кислорода; растут при температуре от 15 до 40 °С. Могут расти на обычных питательных средах, но лучше и с характерной морфологией развиваются на средах, содержащих кровь или сыворотку любого вида животного. На этих средах дифтерийные бактерии вырастают уже через 8—10—12 ч.

  • свернутая лошадиная сыворотка (среда РУ);
  • среда Леффлера (3 части сыворотки + 1 часть мясного бульона с 1% виноградного сахара, 1% пептона);
  • теллуритовые среды.

Очень характерен общий вид роста дифтерийных микробов в пробирках на скошенных свернутых сывороточных средах: колонии не сливаются вместе, вся культура представляется усеянной зернышками, напоминая шагреневую кожу. Колонии круглые, гладкие или слегка зернистые, непрозрачные с полупрозрачной периферией, края ровные, но впоследствии становятся извилистыми или даже зазубренными. На теллуритовых средах дифтерийные палочки образуют темно-серые или черные колонии вследствие восстановления теллурита до металлического теллура. Восстановление происходит внутри бактериальной клетки.

Типы дифтерийных микробов. На основании культуральных свойств различают3 типа дифтерийных микробов:

Тип гравис дает зернистый осадок и пленку на бульоне, на плотных средах образует плоские матовые колонии неправильных очертаний, напоминающие маргаритку. Тип митис равномерно мутит бульон и образует выпуклые полупрозрачные колонии. Третий тип обладает некоторыми свойствами первого и второго типов. Часто встречаются также атипичные формы. У дифтерийных бактерий, как и у других микроорганизмов, наблюдаются:

  • гладкие (S) формы колоний;
  • шероховатые (R) формы;
  • промежуточные (RS).

У высокотоксичных штаммов обычно преобладают R-формы. Дифтерийная палочка вырабатывает кислоту без газообразования в средах с глюкозой, мальтозой и галактозой, но не с лактозой, сахарозой и маннитом. Сбраживание крахмала и гликогена считают характерной особенностью типа гравис. Многие штаммы дают гемолиз на кровяном агаре и лизируют эритроциты, добавленные к культуре.

Дифтерийные бактерии чувствительны к дезинфицирующим средствам: 10%-ная перекись водорода убивает их в течение 3 мин; 1%-ная сулема, 5%-ная карболовая кислота, 50— 60%-ный алкоголь — в течение 1 мин. Низкие температуры (до -190 °С) не убивают дифтерийные бактерии длительное время. Высокая температура приводит к быстрой их гибели. Под действием прямого солнечного света палочки дифтерии гибнут в течение нескольких дней. В пыли они сохраняют жизнедеятельность до 5 недель, в воде и молоке до 6—20 дней. В трупах сохраняются до 2 недель.

3. Серотипы. Дифтерийные бактерии гетерогенны по антигенной структуре, но все вырабатывают одинаковый токсин. Серологическая гетерогенность наблюдается в пределах одного типа. Между 3 типами — гравис, митис и интермедиус — серологическая связь отсутствует. Токсин, продуцируемый всеми 3 типами дифтерийных микробов, тождествен и хорошо нейтрализуется обычными противодифтерийными сыворотками. Среди дифтерийных микробов имеются токсичные и нетоксичные штаммы. Дифтерию вызывают только токсичные штаммы, обладающие способностью продуцировать экзотоксины. Степень токсичности дифтерийных микробов может быть различной. Единицей измерения силы токсина служит минимальная смертельная доза — наименьшее количество токсина, убивающее морскую свинку массой 250 г в течение 3—4 суток. Кроме экзотоксина дифтерийная палочка продуцирует дермонекроток-син, гемолизин, нейраминидазу и гиалуронидазу.

Микробиологическая диагностика. Дифтерийная палочка – возбудители дифтерии

Дифтерийная палочка – возбудители дифтерии.

Дифтерия – острое инфекционное заболевание, характеризующееся токсическим поражением сердечно-сосудистой и нервной систем, а также специфическим фибринозным (дифтеритическим) воспалением в месте входных ворот.

Возбудитель был открыт в 1883 г. Клебсом, в 1884 г. Ф. Леффлер выделил его в чистой культуре. В 1888 г. Ру и Йерсен получили дифтерийный токсин, а в 1895 г. Беринг и Ру независимо друг от друга получили противодифтерийную сыворотку. В 1923 г. Рамон разработали технологию получения дифтерийного анатоксина, а позднее получил противодифтерийную сыворотку. Н.Г. Габричевский применил противодифтерийную сыворотку с лечебной целью и организовал ее производство в России.

Таксономия.

Вид – С. diphtheriae

В род Corynebacterium входят около 60 видов. Согласно Международной классификации Берджи этот род разделен на 3 секции:

1) патогенные для человека и животных;

2) патогенные для растений;

Морфология.

Прямые или слегка изогнутые палочки размером 0,3 — 0,6 х 4 — 8 мкм, спор не образуют, имеют микрокапсулу, неподвижны.

Особенностями дифтерийной палочки является наличие булавовидных утолщениях на концах; палочки отличаются также полиморфизмом; характерно взаимного расположения бактерий в мазках – в виде цифр V,X, L (не полное расхождение при делении);

В толстых мазках располагаются в виде «пучка булавок». Булавовидные утолщения на концах связаны с наличием зерен волютина (тельца Бабеша-Эрнста) – производные нуклеиновых кислот, метахроматиновые гранулы полиметафосфата. Бактерии могут образовывать фильтрующиеся и L-формы.

Грамположительные микроорганизмы. При окраске по методу Нейссера тело клетки окрашивается в синий цвет, а зерна волютина — в желтый. Метод Леффлера окрашивает цитоплазму в голубой цвет, а зерна волютина – в темно-синий.

Культуральные свойства.

Возбудители дифтерии — факультативные анаэробы, отимальная температура их культивирования 37 о С, рН 7,3-8,0. Требовательны к питательной среде, для роста необходимо наличие цистина, гистидина, фенилаланина, метионина и т.д. Факторами роста являются Са 2+ , Mg 2+ , Fe 2+ , Zn 2+ , Mn 2+ , Cu 2+ . Для культивирования применяют сывороточные (среда Леффлера), среды с добавлением крови, хинозальную среду Бучина. Дифференциально-диагностические среды: теллуритовая среда (Конради, Трох, 1913г.), глицериновокровяная среда с теллуритом (среда Клауберг ΙΙ), сывороточно-теллуритовый агар с цистином (Тиндаль), теллурит-шоколадный агар Маклеода.

На среде Леффлера бактерии растут в виде серовато-кремовых колоний, по типу «шагреневой кожи».

Читать еще:  Воспаление лимфоузла за ухом у ребёнка: причины, лечение

На теллуритовых средах возбудитель образует серовато-черные колонии, что обусловлено восстановлением теллурита до металлического теллура, имеющего черный цвет и аккумулирующегося бактериями.

Биохимическая активность.

Дифтерийные палочки малоактивны, сбраживают с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу, декстрин, не разлагают сахарозу, лактозу, маннит, восстанавливают нитраты в нитриты. Не гидролизуют мочевину (проба Закса отрицательная), не образуют индол. Разлагают цистеин (проба Пизу положительная).

По культуральным, биохимическим, патогенетическим и некоторым другим свойствам дифтерийные палочки разделяются на 3 биовара.

1) биовар митис, характеризуется свойствами:

    • ферментирует глюкозу, крахмал, мальтозу, не сбраживает сахарозу, гликоген, декстрин;
    • обладает цистиназной активностью;
    • восстанавливает нитраты;
    • уреазная проба отрицательная;
    • на средах с теллуритом образует мелкие гладкие блестящие черные колонии с ровным краем;
    • на жидкой среде дает равномерное помутнение и порошкообразный осадок;
    • дает зоны гемолиза на кровяных средах;
    • малотоксичен;
    • возбудители вызывают легкую спорадическую заболеваемость.

2) биовар гравис, характеризуется свойствами:

    • ферментирует глюкозу, крахмал,декстрин, мальтозу,
    • обладает цистиназной активностью;
    • восстанавливает нитраты;
    • уреазная проба отрицательная;
    • на средах с теллуритом формирует крупные, сухие, матовые, плоские, серо-черные колонии, приподнятые в центре, с радиальной исчерченностью и неровным краем (напоминают маргаритку);
    • на жидкой среде образуется пленка, помутнение, крошковидный или крупнозернистый осадок;
    • дает гемолиз на кровяных средах;

· обладает выраженными токсигенными свойствами;

· выделяется от больных с тяжелой формой дифтерии, вызывает групповые вспышки.

3) биовар интермедиус, характеризуется свойствами:

· на средах с теллуритом образует мелкие сухие матовые серо-черные колонии с прозрачной периферией и неровным краем;

· на жидкой среде дает помутнение с последующим просветлением и образованием мелкозернистого осадка;

· гемолиз на кровяных средах отсутствует.

Антигенная структура.

Дифтерийная палочка имеет 2 антигена

1. О – антиген (групповой), полисахарид клеточной стенки, термостабильный, дает перекрестные реакции с микобактериями и нокардиями;

2. К – антиген (типовой), капсульный, термолабильный, иммуногенный, видоспецифичный.

На практике серотипирование не применяется, однако выпускаются диагностические сыворотки для РА, РПГА.

Для идентификации используют фаготипирование (22 фага) и бактериоцинотипирование (25 бактериоцинов).

Факторы патогенности.

Токсины. Палочка выделяет токсин – дифтерийный экзотоксин. По силе он занимает 3-е место после ботулинического и столбнячного. Термолабильный, высокотоксичный, иммуногенный, протективный, обладает анестезирующим действием. Гистотоксин обладает дермонекротическими, гемолитическими свойствами. Синтезируется в виде неактивного предшественника — единой полипептидной цепи с молекулярной массой 61 кД. Активируется под действием собственной протеазы, которая разрезает полипептид на 2 связанные между собой дисульфидными связями пептида: А (21 кД) и В (39 кД). Пептид В выполняет акцепторную функцию – распознает рецептор, связывается с ним, формирует внутримембранный канал, через который проникает в клетку пептид А. Пептид А – это фермент, который обеспечивает перенос аденозиндифосфатрибозы из НАД на один из аминокислотных остатков (гистидина) белкового фактора элонгации EF-2. В результате модификации EF-2 утрачивает свою активность, что приводит к подавлению синтеза белка рибосомами на стадии транслокации. Токсин синтезируют только С. diphtheriae, лизогенные умеренным конвертирующим tox-профагом, интегрирующимся с помощью сайт-специфической рекомбинации. Оперон, кодирующий синтез токсина имеет промотор tox Р и 3 участка: tox S, tox А, tox В. Тox S – обеспечивает выход токсина через мембрану в периплазматическое пространство бактериальной клетки. Утрата клеткой профага или мутации в tox-опероне делают клетку малотоксичной.

Ферменты патогенности: гиалуронидаза, нейраминидаза, фибринолизин, каталаза – факторы инвазии, лейкоцидин – обеспечивает устойчивость к фагоцитозу;

Структурные и химические компоненты клетки – пили (способствуют адгезии на чувствительных клетках), микрокапсула (обеспечивает устойчивость к фагоцитозу), корд-фактор (6-6-дифосфоэфир трегалозы, коринемиколовая и коринемиколиновая кислоты, обладающие нарушает фосфорилирование в митохондриях), бактериоцины (корицины) кодирование синтеза которых передается плазмидами.

Резистентность.

При нагревании до 60 о С палочки погибают за 10 мин, при 100 о С наступает мгновенная гибель. 5% раствор карболовой кислоты обеспечивает инактивацию через – 1 мин. Под действием прямого солнечного света палочка выживает несколько часов, в высохших пленках и кале – 3-4 мес., на предметах обихода и одежде сохраняется до 15 дней, на мягких игрушках – 3 мес., в воде и молоке – до 20 дней, в пыли – до 5 мес. Дифтерийные палочки чувствительны к пенициллину, тетрациклину, эритромицину.

Эпидемиология.

Источник инфекции – больной человек, носитель или реконвалесцент.

Механизмы передачи инфекции:

– аэрогенный (пути — воздушно-капельный и воздушно-пылевой);

– контактный (путь — непрямой контактный).

Больной опасен (в смысле заражения) с последних дней инкубационного периода.

Входные ворота – слизистые оболочки носа, зева, гортани, трахеи, бронхов, конъюнктивы глаз, наружных половых органов; раневая поверхность, пупочная рана.

Инкубационный период – 2-14-20 дней.

Патогенез.

Возбудители адсорбируются на чувствительных клетках, колонизируют эпителий. Секретируют гистотоксин, который инициирует развитие местного фибринозного воспаления, некроз эпителия, паретическое расширение сосудов с нарушением их проницаемости, отек тканей и выход фибриногена из сосудов. Фибриноген под влиянием тканевого тромбопластина, некротизированных тканей и атмосферным кислородом свертывается. На поверхности образуется фибринозная пленка. На многослойном плоском эпителии — плотная, спаянная с прилежащими тканями; на однослойном – тонкая, легко снимается. Разрастание пленок в воздухоносных путях может привести к асфиксии (истинный круп). Процесс сопровождают регионарные лимфадениты. Системное действие токсина приводит к гемодинамическим нарушениям. Развивается токсический миокардит и ранний паралич сердца. Возможно поражение канальцевого аппарата почек, некроз коркового слоя. В нервной системе – цитолиз нервных клеток с развитием поздних параличей мягкого неба, диафрагмы, сердца, блуждающего нерва. Смерть при дифтерии может наступить от раннего или позднего паралича сердца и диафрагмы, а также в результате истинного крупа (закупорки дыхательных путей оторвавшимися пленками).

У детей грудного возраста чаще развивается дифтерия зева (насмокр, слабая выраженность общих проявлений). Необходимо осматривать пупочную ранку для исключения местного процесса.

Иммунитет.

После перенесенного заболевания развивается стойкий напряженный антитоксический и мало выраженный антимикробный иммунитет. Возможно развитие носительства (10%) и повторное заражение (6-8%). Уровень иммунитета можно установить в РПГА. Диагностические – титры — 1:200 и выше. С той же целью применяется реакция Шика – внутрикожное введение микродоз дифтерийного токсина (1/40 Dlm 0,2 мл) внутрикожно. Через 48 ч появляется покраснение и инфильтрат, что свидетельствует об отсутствии антитоксических антител; при их наличии реакция не возникает. Из-за опасности сенсибилизации организма эту пробу проводят редко.

Микробиологическая диагностика.

Исследуемый материал – слизь из зева, носа, пленки с миндалин, раневое отделяемое, кровь

1. Бактериоскопический метод – микроскопия мазков из исследуемого материала (окраска по Граму, Нейссеру, Леффлеру).

2. Бактериологический метод – выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация. Необходимо не только выделить из исследуемого материала дифтерийную палочку, но и определить ее токсигенность.

Читать еще:  Что такое мастоидит, его характеристика, симптомы и лечение

Определение токсигенности С. dphtheriae:

а) биологическая проба на животных – внутрикожное заражение морских свинок фильтратом культуры дифтерийных бактерий – вызывает некроз в месте введения. Минимальная смертельная доза (20-30 нг) убивает морскую свинку на 4-5 день;

б) заражение куриных эмбрионов (наблюдается гибель под действием токсина);

в) внесение в культуру клеток ( выявление ЦПД);

г) метод твердофазного ИФА с меченными пероксидазой антителами;

д) использование ДНК-зонда для обнаружения tox-оперона в геноме;

е) тест Илека и Оухтерлони (1948 г.) – основу составляет способность токсина и антитоксина диффундировать в агар и образовывать преципитаты (усы, стрелы) по ходу диффузии – метод двойной преципитации в геле, предварительный ответ может быть выдан через 48 часов, через 72 часа – заключение о наличии токсигенных коринебактерий, через 96 часов – окончательный ответ.

3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, реакция Шика.

4. Экспресс – диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция ко-агглютинации.

5. Биохимический и молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox-гена).

Возбудитель дифтерии, его микробиология и характеристика

Патогенные коринебактерии (возбудитель дифтерии): систематика, морфология, культуральные и тинкториальные свойства, биохимические особенности, антигенная структура и токсинообразование, патогенез и клиника. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.

Возбудитель дифтерии — Corynebacterium diphtheriae и большая группа близких по морфологическим и биохимическим свойствам микроорганизмов рода коринебактерий называют коринеформными бактериями или дифтероидами.Они представлены грамположительными неподвижными палочками, чаще с утолщениями на концах, напоминающими булаву (coryne — булава). Дифтероиды широко распространены в почве, воздухе, пищевых продуктах (молоке). Среди них можно выделить три экологические группы:

— патогены человека и животных;

Многие виды дифтероидов являются нормальными обитателями кожи, слизистых зева, носоглотки, глаз, дыхательных путей, уретры и половых органов.

Дифтерия — острое инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, которое характеризуется интоксикацией организма дифтерийным токсином и характерным фибринозным (дифтеритическим) воспалением в месте локализации возбудителя (phther — пленка).

Морфологические и тинкториальные свойства. C.diphtheriae — тонкие полиморфные палочки с булавовидными концами, часто содержащие волютиновые включения, выявляемые окраской метиленовым синим или по Нейссеру. При последнем палочки окрашены в желто — соломенный цвет, зерна волютина (полиметафосфата) — в темно — коричневый цвет. В культурах палочки находятся под углом друг к другу (особенности деления) , образуя различные фигуры — растопыренных пальцев, V, Y, L и т.д. Имеют микрокапсулу, а также фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистых оболочек.

Культуральные свойства. На простых средах коренебактерии дифтерии не растут. Они требуют сред с кровью или сывороткой крови (среды Леффлера, Ру), на которых рост отмечается уже через 10-12 часов, за это время сопутствующая (контаминирующая пробы) микрофлора полностью развиться не успевает.

Наиболее оптимальны теллуритовая среда и теллурит — шоколадный агар Маклеода. Высокие концентрации теллурита калия в этих средах подавляют рост посторонней флоры. Коринебактерии дифтерии восстанавливают теллурит до металлического теллура, что придает их колониям темно — серый или черный цвет.

У этого возбудителя выделяют биотипы — gravis, mitis, intermedius, отличающиеся по морфологии, антигенным и биохимическим свойствам, тяжести заболеваний у человека. Тип gravis чаще вызывает вспышки и более тяжелое течение, для него характерны крупные с неровными краями и радиальной исчерченностью колонии в виде маргаритки (R- формы). Тип mitis вызывает преимущественно легкие спорадические заболевания, образует на плотных средах мелкие гладкие колонии с ровными краями (S- формы). Тип intermedius занимает промежуточное положение, образует на плотных средах переходные по характеристикам RS- формы, однако еще более мелкие. На жидких средах вызывают помутнение сред, образуют крошковидный осадок.

Биохимические свойства. Коринебактерии дифтерии ферментируют глюкозу, мальтозу. Отсутствие активности в отношении сахарозы и мочевины — важный дифференциальный признак среди дифтероидов. Обладают цистеназной активностью (расщепляют цистеин) — проба Пизу.

Антигенная структура. Выделяют О- и К- антигены. Полисахаридные компоненты О- антигенов клеточной стенки обладают межродовыми свойствами, обусловливая неспецифические перекрестные реакции с микобактериями, актиномицетами (нокардиями).

Поверхностные К- антигены — капсульные белки, обладают видовой специфичностью и иммуногенностью. Выделяют 11 серотипов. Серотипы 1-5 и 7 относятся к биовару gravis. Серотипирование культур проводят в РА с диагностическими сыворотками к соответствующим сероварам и полигрупповой агглютинирующей сывороткой.

В серологической диагностике у людей чаще применяют РПГА, более чувствительную, чем РА. В настоящее время применяют также ИФА. Многие штаммы коринебактерий дифтерии (особенно нетоксигенные) обладают спонтанной агглютинабельностью и полиагглютинабельностью.

Факторы патогенности. Токсигенные штаммы возбудителя дифтерии продуцируют сильный экзотоксин (термолабильный высокотоксичный иммуногенный белок). Нетоксигенные штаммы не вызывают заболевания.

Токсин вызывает необратимое блокирование удлинения полипептидной цепи, т.е. любого белкового синтеза. Поражаются в основном определенные системы: симпатико — адреналовая, сердце и кровеносные сосуды, периферические нервы. Отмечаются структурные и функциональные нарушения миокарда, демиелинизация нервных волокон, приводящая к параличам и парезам.

Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы, инфицированные бактериофагом (бета — фагом), несущим ген tox, который кодирует структуру токсина (т.е. несущие гены умеренного профага в своей хромосоме). Фаготипирование применяют для дифференциации штаммов коринебактерий дифтерии.

Эпидемиология. Резервуар — человек (больной, реконвалесцент, бактерионоситель). Основной путь передачи — воздушно — капельный, сезонность — осенне — зимняя. Возбудитель хорошо сохраняется при низких температурах, высушенном состоянии (слюна, слизь, пыль).

Клинико — патогенетические особенности. Возбудитель в месте внедрения вызывает фибринозное воспаление с образованием плотно спаянной с тканями фибринозной пленки. Существенное значение в вызываемой патологии имеет действие экзотоксина (описано в разделе “факторы патогенности” ). По локализации выделяют дифтерию ротоглотки (наиболее часто), дыхательных путей, носа и редкой локализации (глаза, наружные половые органы, кожа, раневая поверхность). Дифтерия зева может быть причиной крупа и асфиксии.

Лабораторная диагностика. Основной метод диагностики — бактериологический. Применяют для выявления больных, бактерионосителей, контактных. Стерильными тампонами берут материал для микроскопии и посевов — слизь из зева и носа, пленки с миндалин и других мест, подозрительных на наличие дифтеритических поражений.

Возбудитель выделяют посевом на элективные теллуритовые среды и кровяной агар. На слизистой оболочке глаза часто выявляют C.xerosis (возможная причина хронических конъюнктивитов), в носоглотке — C.pseudodiphtheriticum (палочка Хофманна), выявляют и другие дифтероиды.

Для дифференциации возбудителя дифтерии от дифтероидов используют такие показатели, как способность восстанавливать теллурит и образовывать темные колонии, пробу Пизу, ферментацию углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза) и мочевины, способность расти в анаэробных условиях (характерно для возбудителя дифтерии).

Обязательным этапом является определение токсигенности культуры. Наиболее распространенные методы — биопробы на морских свинках, реакция преципитации в агаре. Используют также ИФА с антитоксином, генетические зонды и ПЦР для выявления фрагмента А гена tox.

Читать еще:  Капли и спрей ксимелин: инструкция по применению

Лечение. Используют антитоксическую противодифтерийную сыворотку, антибиотики и сульфаниламидные препараты.

Постинфекционный иммунитет — стойкий, преимущественно антитоксический. Для количественного определения уровня антитоксического иммунитета ранее применялась проба Шика (внутрикожное введение токсина), сейчас — РПГА с эритроцитарным диагностикумом, получаемым сенсибилизацией эритроцитов дифтерийным анатоксином.

Профилактика. В основе — массовая иммунизация населения. Используют различные препараты, содержащие дифтерийный анатоксин — АКДС, АДС, АДС- М, АД и АД- М.

Дифтерия, характеристика возбудителя. Микробиологическая диагностика, лечение, профилактика.

Дифтерия – острое антропонозное заболевание, вызываемое токсигенными штаммами Corynebacterium diphtheriae, передающееся воздушно-капельным путем, характеризующееся развитием местного фибринозного воспаления, а также интоксикацией, поражением преимущественно сердечно-сосудистой и нервной систем.

Морфологические и тинкториальные свойства.

Тонкие грамположительные неподвижные палочки, спор и капсул не образуют, утолщены на концах за счёт зёрен волютина, которые выявляют по реакции метахромазии в реакции Нейссера или с толуидиновым синим.

Для коринебактерий характерен выраженный полиморфизм. В мазках они могут располагаться в виде буквы X, Y, V.

Факультативный анаэроб, оптимум роста – 37 . Дифференциально-диагностический средой является кровяной теллуритовый агар (среда Клауберга), на которых образуются колонии чёрного цвета. Элективной средой для накопления чистой культуры является среда Ру-Леффлера (кровяная сыворотка + сахарный бульон). На этой среде образуются характерные желтовато-кремовые колонии.

Для всех штаммов C. diphtheriae характерно расщепление глюкозы с образованием кислоты.

Отличительным признаком дифтерийной палочки является отрицательная проба Закса (не способность расщеплять мочевину).

Другое важное свойство – продукция фермента цистиназы, которая расщепляет цистеин с образованием сероводорода, образующего чёрный осадок с уксуснокислым свинцом (положительная проба Пизу).

По культурально-биохимическим свойствам вид C. diphtheriae делят на 3 биовара: gravis , mitis , intermedius.

Тяжёлый и промежуточный биовары формируют на питательных средах крупные шероховатые матовые колонии с неровными краями (R-колонии), расщепляют крахмал.

Лёгкий биовар формирует на питательных средах мелкие гладкие блестящие чёрные колонии с ровными краями (S-колонии), не расщепляет крахмал.

Имеется видовой O-антиген, а также вариантспецифический K-антиген.

Антигенная структура неоднородна, изменчива, что обуславливает слабую напряжённость антибактериального иммунитета!

Основными являются следующие:

1. Ферменты агрессии и защиты:

— гиалуронидаза (играет ключевую роль в повышении проницаемости сосудистой стенки);

— нейраминидаза и N-ацетилнейрамиатлиаза, которые действуют эстафетно, то есть нейраминидаза отщепляет остатки сиаловых кислот от ганглиозидов, что определяет фиксацию гистотоксина, а N-ацетилнейрамиатлиаза отщепляет пируват от N-ацетилнейраминовой кислоты, и пируват является источником энергии для размножающихся клеток;

— дермонекротоксин – опосредует некроз тканей в месте локализации возбудителя.

Основной фактор патогенности – продукция экзотоксина, который иначе называют гистотоксином.

Токсин состоит из двух фрагментов: A и B. Фрагмент B связывается с рецепторами клеток, а самое токсическое действие проявляет фрагмент А, которая обладает АДФ-рибозилтрансферазной активностью, инактивируя при этом один из факторов элонгации – EF-2. Нарушение синтеза белка приводит к гибели клеток.

Однако мощное токсическое действие оказывается и на ЦНС, а также сердечно-сосудистую систему. По наиболее популярной версии гистотоксин способствует развитию жировой дистрофии миокарда, поскольку нарушает челночный механизм транспорта жирных кислот в митохондрии.

Способность продуцировать экзотоксин определяется tox-геном, наличие которого связано с лизогенной конверсией.

Источник инфекции – больные и носители токсигенных штаммов. Путь передачи – воздушно-капельный.

Наиболее часто входными воротами является слизистая ротоглотки. Гораздо реже в патологический процесс вовлекаются слизистая гортани, повреждённые кожные покровы, слизистая глаз, половых органов.

Размножаясь в месте входных ворот, дифтерийные палочки усиленно продуцируют токсин, который поступает в кровь.

В области входных ворот развивается воспалительная реакция: некроз клеток, повышение проницаемости сосудистой стенки, выход фибриногена, который превращается в фибрин за счёт тромбопластина некротизированных клеток. При этом образуется сероватая плёнка, плотно спаянная с подлежащими тканями.

Инкубационный период 2-10 дней.

Все проявления дифтерии можно разделить на местные и генерализованные.

Местные проявления – формирование плёнки в области зева. Данная плёнка с трудом отделяется от подлежащих тканей, и попытка её отделить приводит к формированию кровоточащих язв. Воспалительная реакция приводит к болезненным ощущениям в горле, а если плёнок становится чрезвычайно много, они накладываются друг на друга, закрывая доступ воздуху, и может наступить асфиксия.

Генерализованные проявления – это, по существу, токсинемия. Возникает лихорадка, выраженная слабость, кахексия. Поражение ЦНС приводит к спутанности сознания, нарушении в координации. Поражение сердца (миокардиты, дистрофия) приводят к болям, одышке, сердечной недостаточности.

После перенесённого заболевания формируется длительный и напряжённый антитоксический иммунитет. В отличие от него, антибактериальный иммунитет ненапряжённый (см. выше).

Материал для исследования:

1. Кусочки дифтерийной плёнки;

2. Носоглоточная слизь

Сбор материала осуществляют не позже 3-4 с момента обращения больного. Его осуществляют ватным тампоном, но если материал транспортируется на дальние расстояния, то можно смочить вату в 5% растворе глицерина.

Посев материала осуществляют на среду Клауберга (восстановление теллурита калия определяет чёрный цвет колоний). Учёт роста на этих средах позволяет судить о том или ином биоваре:

— крупные чёрные колонии с неровными краями в виде розеток – биовар gravis;

— мелкие блестящие чёрные колонии с ровными краями – биовар mitis

Часть колонии пересевают на агар для накопления, после чего традиционно осуществляется микроскопия мазка, наиболее часто используется окраска по Нейссеру (см. выше).

Далее идентификацию токсигенных штаммов осуществляют в следующих направлениях:

— изучение комплекса прочих биохимических свойств

Определение токсигенности чаще всего осуществляют реакцией преципитации в геле («чашечный метод»). Для этого в чашку Петри с питательной средой кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической сывороткой. После чего её засевают штрихами исследуемые культуры перпендикулярно полоске. Далее инкубируют при 37 в течение 18-20 часов. Положительный результат – образование «усов преципитации».

Ускоренно можно определить токсин в крови или культуре с помощью РПГА и ИФА.

Цистиназу определяют по почернению из-за образования сульфида свинца.

Очень важно отдифференцировать дифтерийную палочку от непатогенных коринебактерий, причём наиболее показательной для этого является отрицательная проба Закса (отсутствие расщепления мочевины, поэтому раствор мочевины и фенолового красного не меняет окраски при внесении туда культуры).

С помощью РПГА можно оценивать степень напряжённости антитоксического иммунитета в различных коллективах (например, школы).

ПЦР можно применять для обнаружения tox-гена.

Антитоксическая сыворотка с одновременным использованием этиотропной антибиотикотерапии.

Специфическая профилактика осуществляется:

— АДС-М-анатоксин (адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин с уменьшенным содержанием антигенов);

— французский аналог АДС-М-анатоксин Имовакс Д.Т. Адюльт.

Дата добавления: 2019-09-13 ; просмотров: 10 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector